Minden, amit tudni kell a Covid19-tesztekről

A SARS-CoV-2 fertőzések diagnosztikájában többféle laboratóriumi módszer is alkalmazható: 

• a vírus RNS (a vírus örökítőanyaga) közvetlen kimutatása PCR (polimeráz láncreakcióval) légúti mintából,

• a vírus antigén (a vírus fehérje alkotóelemei) kimutatása rapid fluoreszcens immunoassay-vel légúti mintából

• a vírus elleni antitestek kimutatása vérből.

Az egyes vizsgálati módszerek használhatósága és az általuk szolgáltatott eredmények információtartalma más és más, így szerepük eltérő a diagnosztikai láncban.

1. PCR (RT-QPCR: REVERZ TRANSZKRIPTÁZ KVANTITATÍV POLIMERÁZ LÁNCREAKCIÓ)

A legspecifikusabb és legérzékenyebb vizsgálati módszer a vírus jelenlétének igazolására, mivel annak örökítőanyagát (RNS) mutatja ki a vizsgált mintából. Kritikus jelentőségű a Covid19 kezdeti megelőzésében a pandémiás terjedés szempontjából. A SYNLAB által jelenleg alkalmazott teszt a vírus genetikai állományának 3 szakaszát vizsgálja: kimutatja az E gént, az RdRP gént, és a magasabb érzékenységű N gént is, így a használt PCR reakció igen nagy érzékenységűnek tekinthető.

Hogyan történik a vizsgálat?

Felsőlégúti minta (orrból és garatból történő mintavétellel) küldhető vizsgálatra. Eredmény: a vizsgálatot végző laboratóriumba érkezéstől számítva 24-48 órán belül.

Mik az előnyei?

• A vírus légúti jelenlétének igazolására a legjobb, gold standardnak tekinthető módszer

• Kiváló érzékenység és magas specificitás jellemzi

• A fertőzőképesség legjobb vizsgálati módszere

Mik a korlátai?

• Hosszadalmasabb mintavételi folyamat és várakozási idő az eredményre

• A mintavétel speciális mintavételi eszközt és szaktudást igényel, kellően képzett és gyakorlott személy végezheti védőfelszerelésben

• A nem megfelelő mintavétel álnegatív eredményhez vezethet

• A vizsgálat kivitelezése és értékelése magas szaktudást igényel, csak speciális felszereltségű molekuláris diagnosztikai laboratóriumban végezhető el

• A folyamat számos, egymásra épülő lépésből áll, melyek mindegyike több órát is igénybe vehet, ezért hosszabb idő szükséges a lelet elkészüléséig

A PCR a legdrágább teszt a Covid19-diagnosztikai lehetőségek között. Egyéni páciensek vagy kisebb közösségek vizsgálata esetén mindenképpen ez javasolt, nagyobb közösségek tesztelésénél más kivizsgálási algoritmus is alkalmazható lehet.

2. RAPID ANTIGÉN TESZT

Magas specificitású, a PCR-hez képest alacsonyabb érzékenységű, de annál olcsóbb vizsgálati módszer. A vírust közepes vagy magas mennyiségben ürítő páciensek légúti mintáinak elemzése során a vírus S-proteinjét mutatja ki. Abban az esetben ideális, ha nagy valószínűséggel koronavírus-fertőzött a beteg, és ezt szeretnénk kimutatni. Alacsonyabb érzékenysége miatt a negatív eredmény nem zárja ki az éppen aktuális fertőzés fennállását, így ezt meg kell erősíteni az RT-PCR vizsgálattal.

Hogyan történik a vizsgálat? 

Felső légúti minta (orrból és/vagy garatból történő mintavétellel) küldhető a vizsgálatra. Eredmény: a vizsgálatot végző laboratóriumba érkezéstől számítva akár 15 perc/minta is lehet.

Mik a vizsgálat előnyei?

• A vírus légúti jelenlétének igazolására szolgáló, kiváló specificitású (fluoreszcens detektálási módszeren alapuló) gyors metodika

• Ez támogatja a gyors döntéshozatalt olyan helyzetekben, ahol a fertőzöttek mielőbbi elkülönítése szükséges

• A gyorsteszt leolvasását speciális leolvasó eszköz (fluoreszcens reader) segíti, így azt nem kell szemmel értékelni

• A teszt elvégzéséhez és értékeléséhez professzionális laboratóriumi személyzetre és háttérre van szükség, mégsem szükséges speciális molekuláris diagnosztikai laboratóriumban kivitelezni a vizsgálatot, kórházi laborokban is elvégezhető, ahol gyors döntésekre van szükség a betegek benntartásáról

Mik a vizsgálat korlátai?

• A mintavétel speciális mintavételi eszközt és szaktudást igényel, kellően képzett és gyakorlott személy végezheti védőfelszerelésben

• A nem megfelelő mintavétel álnegatív eredményhez vezethet

• Mivel érzékenysége alacsonyabb a PCR-nél, elsődlegesen olyan esetben használható, ahol magas a betegség előfordulási gyakorisága, tehát a pozitív eredmények száma várhatóan magas lesz

• Ha túl korán, a betegség kezdeti fázisában történik a mintavétel, születhet negatív eredmény, mivel az RNS-hez képest a vírusfehérjék később válnak kimutathatóvá a légutakban

• Kizárólag kvalitatív tesztelésre alkalmas, mennyiségeket nem mutat, az eredmény így csak pozitív vagy negatív minősítésű lehet

3. SZEROLÓGIAI VIZSGÁLATOK (COVID-19 SPECIFIKUS ANTITESTEK KIMUTATÁSA VÉRMINTÁBÓL)

A szerológiai tesztek a vírus ellen termelődött ellenanyagokat mutatják ki vérmintából. Az antitest kimutatási metodikák a szervezet válaszreakciójáról adnak képet, így a vizsgálatok információtartalma különbözik a direkt víruskimutatási eljárásokétól. Míg a PCR és az antigénteszt a vírus jelenlétét igazolhatja, addig a szerológiai tesztek azt vizsgálják, hogy korábban találkoztunk-e a vírussal, elkezdődött-e már egy arra specifikus válaszreakció. Akut fertőzés kimutatására a szerológiai tesztek önmagukban nem alkalmasak, de segítséget nyújtanak a betegség teljes diagnosztikájában, kiegészíthetik a közvetlen kórokozó-kimutatási módszereket, komplexebbé téve azok eredményének értékelését. Segíthetnek a tünetmentes fertőzöttek, illetve a fertőzésen már átesett, immunitást szerzett személyek felderítésében.

Rapid antitest tesztek

Ezek a tesztek a vérben található Covid19-specifikus ellenanyagok (IgM és IgG) gyors, „ágymelletti” kimutatására szolgálnak. Számos ilyen teszt került forgalomba hazánkban is, azonban nem mindegy, hogy az adott tesztről milyen gyártói bevizsgálási adatok állnak rendelkezésre, milyen a tesztek teljesítőképessége (érzékenysége, specificitása, reprodukálhatósága), és azokat mennyire tudja igazolni professzionális laboratórium a gyakorlatban.

Hogyan történik a vizsgálat?  

A vizsgálatot natív vérminta savójából javasolt elvégezni. Eredmény: a vizsgálatot végző laboratóriumba érkezéstől számítva akár 15 perc/minta.

Mik a vizsgálat előnyei?

• Gyorsan elvégezhető, akár ágy mellett is

• A legkedvezőbb árú tesztek

• Az eredmények leolvasásához nem szükséges külön eszköz, a tesztkazetta szemmel is értékelhető

Mik a vizsgálat korlátai?

• Pontatlanabb az automatizált antitest tesztekhez képest (lsd. lejjebb), hiszen a gyorstesztekre jellemző módon a fals eredmények nagyobb számban fordulhatnak elő

• A leolvasási idő be nem tartása hibás eredményhez vezethet

• Lokális felhasználás és az ujjbegyből történő vérvétel esetén nem végezhető nagy tömegben

• A vizsgálat érzékenysége és volumene növelhető, ha nem ujjbegyből történik a mintavétel, hanem vénás vérből, professzionális laboratóriumi környezetben

• Csak kvalitatív eredményt ad, így az ellenanyag-válasz időbeli változásának megítélésre kevésbé alkalmas

• Az eredmény álnegatív lehet, ha a betegség korai fázisában történik a mintavétel

• Más vírusok hasonló fehérjéi ellen termelődött antitestek keresztreakciót okozhatnak, mely álpozitív eredményhez vezethet! (A specificitást befolyásolja, hogy a vírus melyik antigénje ellen termelődött antitestet vizsgálja a teszt, és az mennyire specifikus a SARS-CoV-2 vírusra.)

• Nem tudni, hogy a vizsgált IgG antitest tartós védelmet nyújt-e a páciens számára a további SARS-CoV-2 fertőzésekkel szemben, vagy sem

• Az eredmények értékelését megnehezíti, hogy az akut immunválaszra jellemző IgM akár tartósan is jelen lehet a vérben, annak ellenére, hogy a vírus esetleg már nem kimutatható a légutakban, és ez téves következtetésekhez vezethet (akutnak minősítik a fertőzést).

Mire figyeljünk a teszt kiválasztásánál?

• Rendelkezik-e a teszt diagnosztikai minősítéssel? (Több, piacon elérhető teszt csak kutatási célra használható!)

• Ismert-e, hogy milyen a különböző gyártási sorozatok megbízhatósága? (Előfordulhat, hogy az egyik sorozatú teszt még működik, míg egy másik már nem. A gyártónak ellenőrizni és biztosítania kell, hogy a különböző időpontban gyártott sorozatok azonos minőséget hozzanak.)

• Van-e adat arról, hogy mely kórokozókkal vizsgálták be a keresztreaktivitás lehetőségét, ami esetleges álpozitív eredményhez vezethet?

• Rendelkezésre áll-e adat arról, hogy a betegség melyik fázisában, hány páciensen vizsgálták be a teszt teljesítőképességét (szenzitivitását és specificitását)?

Fentiek miatt mindenképpen javasolt, hogy az ilyen teszteket professzionális laboratóriumi szolgáltatótól igényeljék, ahol a szaktudás rendelkezésre áll az eredmények értelmezéséhez.

Automatizált antitest (ELISA és egyéb immunoassay-alapú) tesztek

Ezek a tesztek a SARS-CoV-2 elleni IgG vagy IgA/IgM immunoglobulin osztályú humán antitestek kimutatását jelentik nagy teljesítményű automatákon, és kiegészítik a közvetlen kórokozó kimutatási módszereket. Ezenkívül epidemiológiai adatok gyűjtésére is felhasználhatók. Az antitest kimutatási eredmények helyes értékelése érdekében (hasonlóan más fertőzéses betegségekhez) két betegmintát szükséges megvizsgálni ahhoz, hogy a szerológiai státusz megítélhető legyen, egyet az akut fázisból, ami a betegség 1. hete, a másikat pedig 2–4 héttel később.

Hogyan történik a vizsgálat?

A vizsgálat natív vérminta savójából végezhető. Eredmény: a laboratóriumba érkezéstől néhány órán belül.

Mik a vizsgálat előnyei?

• Automatizálható, így nagy tömegű szűrésre is alkalmas

• Kevesebb az álpozitív vagy álnegatív eredmény, mivel érzékenysége és specificitása sokkal jobb, mint a rapid antitest teszteké

• A jobb minőségű tesztek a vírus S1 proteinje ellen termelődött antitestet mutatják ki, mely magasabb specificitást tesz lehetővé

• Ellenőrzött minőségű, bevizsgált, megbízható tesztek

Mik a vizsgálat korlátai?

• Egyes tesztek csak kvalitatív eredményt adnak, így az ellenanyag-válasz időbeli változásának megítélésre kevésbé alkalmasak

• Az eredmény álnegatív lehet, ha a betegség korai fázisában történik a mintavétel, ugyanakkor a szenzitivitás növelhető, ha a betegség későbbi szakaszában történő mintavétel esetén többféle antitest (pl.: IgA/IgM és IgG) együttes vizsgálata történik meg

• Álpozitív eredmény születhet a vírus más antigénje ellen termelődött antitest kimutatása esetén (más vírusok, pl.: SARS-CoV-1 hasonló fehérjéi ellen termelődött antitestek keresztreakciót okozhatnak)

Fontos!

• A szerológiai vizsgálatok egyike sem alkalmas önmagában az akut fertőzés bizonyítására!

• Egyetlen vérmintából egyik antitestvizsgálati módszer sem tudja bizonyítani vagy kizárni az esetleges fertőződést! A savópár vizsgálat (két betegminta a betegség két fázisában) lehet alkalmas a szerológiai státusz tisztázására, de ez víruskimutatás nélkül nem zárhatja ki az éppen aktuális fertőzőképességet. Az RT-PCR vizsgálat és az antitestszűrés együttes alkalmazása nagyobb biztonságot ad a fertőzöttek felismerésében és elkülönítésében!

Összefoglalva:

Amennyiben a PCR eredménye és az antitest eredményei negatívak lettek, megnyugodhat: igen nagy valószínűséggel kizárható, hogy fertőzött lenne a vírussal. Ugyanakkor védettséggel sem rendelkezik, tehát továbbra is óvatosnak kell lennie, figyelnie kell megelőzésre (maszkviselés, szociális távolságtartás, kontaktus lehetőségek csökkentése, rendszeres kézfertőtlenítés stb.)

• ha a PCR eredménye és az IgM eredménye negatív, míg az IgG pozitív, akkor nagy valószínűséggel már találkozott a vírussal és rendelkezik védettséggel. Megnyugodhat, de továbbra is legyen óvatos! (Előfordulhat újrafertőződés, hiszen a vírus mutálódhat!)

• Minden más esetben feltétlenül konzultáljon háziorvosával, vagy a Nemzeti Népegészségügyi Központ (NNK) hivatalos csatornáin keresztül vegye fel a kapcsolatot az illetékesekkel!

A vírusról

• A SARS-CoV-2 a koronavírusok családjába tartozó vírus, mely súlyos, akut légzőszervi szindróma képében jelentkező betegséget okoz.

• Elsősorban cseppfertőzéssel terjed, köhögés vagy tüsszentés útján, a fertőzött betegekkel való kontaktusba kerülés esetén.

• A fertőzés lappangási ideje átlagosan három-hét nap (maximum 14 nap).

• Tünetei elsősorban: láz, köhögés, légzési nehezítettség és fáradtság.

• A legtöbb betegnél a fertőzés enyhe lázas betegség formájában nyilvánul meg, azonban elsősorban idős vagy krónikus betegségben szenvedőknél súlyos, akut légzési distressz szindróma (ARDS) is kialakulhat.

• A betegség az esetek egy részében halállal végződik, korcsoportos bontás alapján a mortalitási valószínűség 0,2-14,8% között alakul a 10-80+ éves korosztályban.

• A férfiak halálozási kockázata majdnem kétszerese a nőkének.

• 2020 februárjában a SARS-CoV-2 által okozott betegséget a WHO Covid19-nek nevezte el. Legkorábban a vírus RNS-e mutatható ki, az antigén néhány nappal később kezd el pozitívvá válni, az ellenanyagok szintje pedig kb. 7-10 nappal a fertőzés kezdetét követően kezd el emelkedni a vérben.

Forrás: SYNLAB